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本試劑盒采用改進(jìn)的 SDS 堿裂解法，結(jié)合 DNA 磁珠選擇性吸附 DNA 的方法，達(dá)到快速純化質(zhì)粒 DNA的目的。適合從 1-4mL 細(xì)菌培養(yǎng)物中提取多至 20μg 高純度的質(zhì)粒 DNA，用于測(cè)序、體外轉(zhuǎn)錄與翻譯、限制性內(nèi)切酶消化、細(xì)菌轉(zhuǎn)化等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品信息

Rnase A： 50 mg/mL ,室溫保存。
Buffer S1：細(xì)菌懸浮液。加入 Rnase A 后，4℃保存。
Buffer S2：細(xì)菌裂解液，室溫密閉儲(chǔ)存。若出現(xiàn)沉淀，應(yīng)于 37℃溫浴溶解并冷卻至室溫后再使用。
Buffer N3：中和液，室溫密閉儲(chǔ)存。 Beads: 磁珠溶液，4℃儲(chǔ)存。
Elutent：2.5 mM Tris-HCl, pH 8.5，室溫密封儲(chǔ)存。

操作流程

使用前準(zhǔn)備
        70% 乙醇
        第一次使用前，RNase A 全部加入 Buffer S1 中，4℃儲(chǔ)存
        準(zhǔn)備無(wú)核酸和核酸酶污染的 Tip 頭等耗材
        異丙醇
        磁性分離器：可選用海貍磁性分離器，Cat.60201

操作流程

1.第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1中，4℃儲(chǔ)存。

2.取1-4mL在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過(guò)夜的菌液（若使用豐富的培養(yǎng)基，菌液體積應(yīng)減半或更少），12000g離 心1min，棄上清。

3.用100μL已加入RNase A的Buffer S1懸浮細(xì)菌沉淀，懸浮需均勻，不應(yīng)留有小的菌塊。

4.加入100 μLBuffer S2，溫和并充分地上下翻轉(zhuǎn)混合6-8次，12000g離心10min。

5.吸取125μL步驟4中的離心上清于一新的1.5mL離心管中。

6.加入40 μL beads和60 μL的異丙醇，用槍頭吹打3-5次。

表1：轉(zhuǎn)移不同上清液量和對(duì)應(yīng)beads和異丙醇體積用量

      a）Beads易沉淀，使用前應(yīng)搖勻，使Beads充分混勻
      b）根據(jù)上清體積調(diào)整異丙醇的比例

7.室溫放置5min,放置過(guò)程中，用槍頭吹打混合2-3次。

8.將反應(yīng)管置于磁力架上靜置30s，直至磁珠完全吸附至管壁，上清清澈后，吸棄液體。
a）注意勿將磁珠吸出
b）棄液體后，勿將反應(yīng)管從磁力架上取出

9.加入200μL70%乙醇，在室溫下放置30s，吸棄液體。重復(fù)操作1次。
a）注意勿將磁珠吸出
b）注意在磁力架上操作，勿從磁力架上取出反應(yīng)管
c）請(qǐng)務(wù)必吸盡反應(yīng)管內(nèi)殘留的液體

10.讓磁珠在室溫下干燥3-5min.
a）注意在磁力架上操作，勿從磁力架上取出反應(yīng)管
b）在室溫下翻轉(zhuǎn)取出殘留的乙醇
c）勿使磁珠過(guò)分干燥，否則將影響DNA得率

11.移去磁力架，加入60-100μL Eluent或去離子水，用移液器吸頭輕輕吹打管壁磁珠，直至分布均勻，靜置2min。

12.將反應(yīng)管置于磁力架上，靜置直至磁珠全部吸附至管壁，吸取上清至一新的離心管中，即得高純度的DNA。